【摘要】 目的优选夏枯草的最佳提取条件。方法 以齐墩果酸含量为指标，采用L3(34)正交实验，对影响超声提取的因素（乙醇浓度、乙醇用量、提取时间）进行优选。结果最佳提取条件为乙醇浓度90%，用量20倍，时间40 min。结论 优选夏枯草提取工艺稳定、可行。
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【关键词】 夏枯草 正交实验 齐墩果酸
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Studies on the Orthogonal Experiment for Optimization of Extraction Procedure of Prunella vulgaris L.
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Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction process of Prunella vulgaris L..MethodsThe extraction process of Prunella vulgaris L was optimized by L3(34) orthogonal test with Caryophyllin as index, and with concentration of alcohol, amount of alcohol and extraction time. ResultsThe optimal extraction technology was 90% alcohol, 20 times the amount of herb material with 40 mins. ConclusionThe optimal extraction process is steady and reliable.
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Key words：Prunella vulgaris L.； Orthogonal test； Caryophyllin
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夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，我国各地均产，主产于江苏、浙江、安徽、河南等地［1］。夏枯草临床应用广泛，《中国药典》中载有“清火，明目，散结，消肿”［2］之功效，现代研究表明夏枯草还具有降血脂、降血糖、免疫抑制以及抗肿瘤等作用［3］。夏枯草中含有丰富的三萜类化合物，其中以齐墩果酸（oleanolic acid）和熊果酸（ursolic）的含量最高。现采用正交实验法，以齐墩果酸为指标，对夏枯草的提取条件进行优化选择，为夏枯草的生产和应用提供依据。
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1 仪器与试药
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日立高效液相色谱仪，DAD检测器，EZChrom Elite色谱工作站；KQ-100A型超声波清洗器；电子天平。
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夏枯草对照药材及齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所）。
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甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。
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2 方法与结果
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夏枯草对照药材粉末，60℃干燥至恒重，备用。
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2.1 提取方法选择实验
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2.1.1 浸渍法
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取夏枯草药材粉末1 g，加95%乙醇20 ml，浸渍24 h，时时摇动，滤过，浓缩干燥。
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2.1.2 加热回流法
取夏枯草药材粉末1 g，加95%乙醇20 ml，加热回流2 h，滤过，浓缩干燥。
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2.1.3 超声法
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取夏枯草药材粉末1 g，加95%乙醇20 ml，超声30 min，滤过，浓缩干燥。
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取上述夏枯草提取物样品，分别测定齐墩果酸含量，结果见表1。可见，3种提取方法中，以超声法提取所得齐墩果酸含量最高，故选用超声法对夏枯草药材进行提取。表1 3种提取方法的比较（略）
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2.2 提取条件的正交实验以乙醇浓度（A）、乙醇用量（B）、提取时间（C）为考察因素，每个因素各取3个水平。见表2。表2 实验因素水平（略）
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2.3 正交实验样品中齐墩果酸的含量测定
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2.3.1 色谱条件
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色谱柱为Hypersil C18（10 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相为甲醇-水-冰醋酸（88∶12∶0.1）；流速1 ml/min；柱温25℃；检测波长210 nm。
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精密量取齐墩果酸对照品溶液0.5，1，2，3，4，5 ml分别加流动相定容至10 ml。在上述色谱条件下重复进样3次，10 μl/次，测定峰面积积分值，以峰面积积分平均值Y和浓度C进行线性回归，得回归方程为：Y=19 998 014.3C-54 553.97，r=0.999 9，齐墩果酸溶液在0.25～2.5 mg/ml范围内线性关系良好。
本文以乙醇为溶媒，以齐墩果酸含量为指标，通过正交设计实验方法研究超声提取法提取夏枯草的工艺条件，并对影响提取较大的乙醇浓度、乙醇用量、超声时间等因素进行考查，筛选出最佳的提取工艺条件为乙醇浓度90%，用量20倍，时间40min。
